Окрашивание по граму: шаг за шагом и для чего оно нужно

Контент:

Окрашивание по Граму, или просто по Граму, — это быстрый и простой метод, целью которого является дифференциация бактерий в соответствии с характеристиками их клеточной стенки после воздействия различных красителей и растворов.

Таким образом, с помощью окрашивания по Граму можно проверить, помимо формы бактерий, и цвет, который они приобретают, что является важным результатом для определения других стратегий идентификации видов бактерий и для назначения врачом профилактического лечения в соответствии с к наблюдаемым под микроскопом признакам.

Окрашивание по Граму обычно проводится в лаборатории и является частью бактериоскопического исследования. Узнайте, что такое бактериоскопия и как она проводится.

Как проводится окрашивание по Граму?

Окрашивание по Граму — это быстрый, практичный и недорогой метод идентификации бактерий, ответственных за инфекции, который полезен врачам для определения профилактического лечения инфекции, поскольку известны специфические характеристики этих групп бактерий.

Окрашивание по Граму проводится в 7 основных этапов, однако протокол может варьироваться в зависимости от лаборатории:

  1. Поместите несколько колоний бактерий на предметное стекло, добавив каплю воды для облегчения гомогенизации колоний;
  2. Дайте ему немного высохнуть, и лезвие может быстро пройти через пламя, чтобы способствовать высыханию, однако важно обратить внимание на температуру, так как при слишком высокой температуре возможно изменение структуры лезвия. бактерии, которые могут повлиять на результат исследования;
  3. Когда предметное стекло высохнет, покройте его кристаллическим фиолетовым красителем и дайте ему подействовать примерно на 1 минуту;
  4. Промойте предметное стекло струей проточной воды и покройте предметное стекло люголем, предназначенным для фиксации синего красителя, и дайте ему подействовать в течение 1 минуты. Оба вида бактерий могут поглощать комплекс, образованный красителем и люголем, окрашиваясь в синий цвет;
  5. Затем промойте предметное стекло проточной водой и нанесите 95% спирт, дав ему подействовать на 30 секунд. Спирт отвечает за растворение липидной оболочки, образующей грамотрицательные бактерии, и, таким образом, за удаление комплекса, образующегося между красителем и люголем, обесцвечивания этих бактерий. Однако в случае грамположительных бактерий спирт обезвоживает клеточную стенку грамположительных бактерий, вызывая сужение пор и делая их непроницаемыми;
  6. После этого снова промойте его в проточной воде и покройте предметное стекло вторым красителем, фуксином или сафранином, и дайте ему подействовать в течение 30 секунд;
  7. Затем промойте слайд проточной водой и дайте ему высохнуть при комнатной температуре.

Как только предметное стекло высохнет, можно нанести каплю иммерсионного масла и рассмотреть предметное стекло под микроскопом с объективом 100x, что позволяет проверить наличие или отсутствие бактерий, а также наличие дрожжей и эпителиальных клеток.

для чего это

Окрашивание по Граму направлено на дифференциацию бактерий в соответствии с характеристиками клеточной стенки и общей морфологией. Таким образом, по признакам, наблюдаемым под микроскопом, бактерии можно разделить на:

  • грамположительные бактерии , которые визуализируются синим цветом из-за того, что не обесцвечиваются спиртом, так как имеют более толстую клеточную стенку и их поры сужаются при воздействии люголя;
  • Грамотрицательные бактерии , которые визуализируются как розовые/пурпурные из-за отбеливания спиртом и окрашивания сафранином или фуксином.

После просмотра бактерий под микроскопом в лаборатории могут быть проведены другие тесты для определения вида бактерий. Однако с помощью Грамма и ассоциации с признаками и симптомами, представленными человеком, врач может назначить профилактическое лечение до тех пор, пока не будут доступны результаты более конкретных тестов, поскольку таким образом можно снизить скорость размножения бактерий и предотвратить осложнения.